Resumen
El desarrollo la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) ha revolucionado el campo de la Biología Molecular. El principio básico de la PCR es la amplificación exponencial de la secuencia ADN molde, utilizando oligonucleóticos sintéticos iniciadores cuyas secuencias corresponden con la secuencia blanco y delimitan el segmento de ADN a amplificar. La naturaleza exponencial de la amplificación se logra mediante ciclos repetidos de desnaturalización, hibridación y extensión, que conforman una ronda de amplificación. Previo a la realización de la PCR, es necesario disponer del material genético a ser amplificado, que puede ser ADN o ARN; en el caso de ARN se procederá previamente a la síntesis de una hebra complementaria de ADN mediante trascripción reversa. Las tecnologías utilizadas para medir carga viral pueden dividirse en 2 categorías: 1) donde la carga viral es detectada sin amplificación de la muestra original (como es el caso del sistema de sonda ramificada o bDNA) ó 2) donde el genoma viral es amplificado, obteniéndose una medida indirecta de la carga viral, generalmente mediante la comparación con estándares internos. En esta última categoría los más conocidos son el ensayo Amplicor, el de captura de híbridos y el NASBA. La cuantificación viral puede realizarse también mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) competitiva; sin embargo, esta técnica es relativamente delicada de poner a punto en el laboratorio. Todas estas técnicas proporcionan una información valiosa y confiable con respecto a la carga viral ; sin embargo, los resultados obtenidos a través de una técnica no son forzosamente comparables con los obtenidos por otra metodología, por lo que es importante que el seguimiento del paciente infectado se realice siempre usando la misma técnica. La técnica de PCR ha generado igualmente una verdadera revolución en el estudio de la variabilidad genómica de microorganismos, en particular de los virus. Si bien la información óptima vendrá siempre proporcionada por la secuenciación parcial o total del genoma estudiado, existe una variedad de técnicas rápidas que permiten el análisis de un número mayor de muestras y son de gran utilidad tanto en la clínica como en la epidemiología molecular.
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